查看更多>>摘要:目的 探究润肌丹油是否可通过调控巨噬细胞极化促进糖尿病溃疡愈合,为润肌丹油治疗糖尿病足溃疡提供更多的理论依据.方法 取35只SD大鼠,随机选择10只作为空白组,其余25只大鼠采用高糖高脂饮食联合链脲佐菌素(STZ)诱导法建立糖尿病模型.然后在空白组大鼠和造模大鼠背部采用手术形成3.0 cm ×3.0 cm的缺损性创面,对造模大鼠以创面涂抹50%冰醋酸法建立糖尿病溃疡模型,将20只糖尿病溃疡造模成功大鼠随机分为糖尿病溃疡组和润肌丹油组,每组10只.空白组、糖尿病溃疡组使用生理盐水纱布覆盖创面,润肌丹油组使用润肌丹油纱布覆盖创面,干预14 d,此过程中空白组大鼠给予常规标准饲料喂养,其余组大鼠给予高糖高脂饲料喂养.观察各组干预前、干预7 d后、干预14 d后的溃疡面积,计算干预7 d后、干预14 d后的溃疡愈合率.实验结束时,取溃疡组织进行HE染色病理学观察,Western blot法检测溃疡组织中血管内皮生长因子B(VEGFB)、成纤维细胞生长因子1(FGF1)和血小板衍生生长因子亚基B(PDGFB)蛋白表达情况,ELISA法检测溃疡组织中M1型巨噬细胞分泌的促炎细胞因子[白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-12(IL-12)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、M2型巨噬细胞分泌的抗炎细胞因子[白细胞介素-4(IL-4)]及生长因子[转化生长因子-β(TGF-β)、血管内皮生长因子A(VEG-FA)]水平,免疫荧光法测定溃疡组织中M1型和M2型巨噬细胞分布情况,流式细胞术检测糖尿病溃疡组和润肌丹油组溃疡组织中M1型和M2型巨噬细胞分类情况,计算溃疡组织中F4/80/CCR7和F4/80/CD206阳性染色细胞的比值(M1/M2型巨噬细胞比值).结果 糖尿病溃疡组和润肌丹油组换药7 d、14 d后的溃疡面积均明显大于空白组(P均<0.05),溃疡愈合率均明显低于空白组(P均<0.05);润肌丹油组换药7 d、14 d后的溃疡面积均明显低于同期 糖尿病溃疡组(P均<0.05),溃疡愈合率均明显高于同期糖尿病溃疡组(P均<0.05).换药14 d后,糖尿病溃疡组溃疡组织中见大量炎性细胞浸润,少量成纤维细胞及毛细血管生成,炎症反应重;润肌丹油组溃疡组织中炎性细胞浸润情况介于空白组和糖尿病溃疡组之间,见大量新生毛细血管和纤维细胞及少量肉芽组织.润肌丹油组溃疡组织中VEGFB、FGF1和PDGFB蛋白相对表达量均明显高于空白组和糖尿病溃疡组(P均<0.05).与空白组比较,糖尿病溃疡组溃疡组织中IL-6、IL-12、TNF-α、IL-4、TGF-β、VEGFA水平均明显升高(P均<0.05);与糖尿病溃疡组比较,润肌丹油组大鼠溃疡组织中IL-6、IL-12、TNF-α水平均明显降低(P均<0.05),IL-4、TGF-β、VEGFA水平均明显升高(P均<0.05).糖尿病溃疡组M1型和M2型巨噬细胞绝对细胞数均明显高于空白组(P均<0.05);润肌丹油组M1型巨噬细胞绝对细胞数明显低于糖尿病溃疡组(P<0.05),M2型巨噬细胞绝对细胞数明显高于糖尿病溃疡组(P<0.05).润肌丹油组溃疡组织细胞单细胞悬液中M2型巨噬细胞明显多于糖尿病溃疡组(P<0.05);糖尿病溃疡组M1/M2型巨噬细胞比值明显高于空白组(P<0.05),润肌丹油组M1/M2型巨噬细胞比值明显低于糖尿病溃疡组(P<0.05).结论 糖尿病溃疡存在M1/M2型巨噬细胞比值失衡;润肌丹油可以促进巨噬细胞向M2型巨噬细胞极化,减少M1型巨噬细胞,改善M1/M2型巨噬细胞失衡,从而减少M1型巨噬细胞分泌的促炎细胞因子,增加M2型巨噬细胞分泌的抗炎细胞因子及生长因子,抑制炎症反应,促进糖尿病溃疡愈合.