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畜牧兽医学报
中国畜牧兽医学会
畜牧兽医学报

中国畜牧兽医学会

文杰

月刊

0366-6964

xmsyxb@263.net

010-62815987 62816996 62893836

100193

北京海淀区圆明园西路2号

畜牧兽医学报/Journal Acta Veterinaria Et Zootechnica SinicaCSCD北大核心CSTPCD
查看更多>>本学报是中国畜牧兽医学会主办，《畜牧兽医学报》编委会、中国农业科学院畜牧研究所编辑出版的全国性的畜牧兽医学术刊物。创刊于1956年7月，刊登较高水平的学术论文和企业研究报告以及对生产实践具指导性、启发性的文章。为全国中文核心期刊、中国自然科学核心期刊，并被国内外重要引文数据库及文摘性期刊收录。主要栏目包括畜牧和兽医两大学科。
正式出版
收录年代

    禽致病性大肠杆菌cOmpT单克隆抗体的研制及其识别抗原表位的鉴定

    薛菲杨梓纯许炎辉王娅玲...
    3122-3132页
    查看更多>>摘要：旨在制备禽致病性大肠杆菌(APEC)染色体编码外膜蛋白(cOmpT)的特异性单克隆抗体,本研究利用实验室已构建的APEC cOmpT重组表达质粒pET-28a-comp T,经IPTG诱导表达后,获得以包涵体形式存在的约36 ku的重组蛋白cOmpT,利用尿素浓度梯度透析复性获得纯化蛋白cOmpT,并以此免疫BALB/c小鼠.建立间接ELISA检测方法,最适抗原包被浓度为0.625μg·mL-1,最适血清稀释度为1:6400.4次免疫后取小鼠脾进行细胞融合,采用有限稀释法多轮筛选后得到3株能稳定分泌针对cOmpT蛋白的单克隆抗体,分别命名为1G8、2C3和2G3,均为IgG2b亚类.3株杂交瘤细胞上清ELISA抗体效价分别为1:200、1:3200和1:3200.Western blot结果显示,3株单抗均能与cOmpT发生特异性反应,而不与其他受检菌发生交叉反应.运用原核表达系统对compT基因进行截短表达,对单克隆抗体针对的cOmpT抗原表位进行鉴定,结果显示单抗1G8、2C3和2G3识别的抗原表位分别是83DQDWMDS89、90SNPGTW95和197TFKYSGW203.本研究成功制备了3株抗cOmpT蛋白的单克隆抗体,并对其识别的抗原表位进行了鉴定,为cOmpT蛋白功能研究和APEC新型表位疫苗研发奠定了基础.

    禽致病性大肠杆菌cOmpT单克隆抗体抗原表位

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    基于NS4蛋白的蓝舌病病毒间接ELISA抗体检测方法的建立及初步应用

    易华山赵瑶马鲜平李欢...
    3133-3140页
    查看更多>>摘要：旨在建立蓝舌病病毒(BTV)血清学ELISA抗体检测方法,本研究以原核表达并纯化的BTV NS4重组蛋白为包被抗原,通过反应条件优化,建立了一种BTV重组NS4蛋白的间接ELISA抗体检测方法.SDS-PAGE结果显示,获得大小约52 ku的NS4重组融合蛋白,主要在上清中存在,Western blot显示,纯化后的重组蛋白具有良好的抗原性.通过方阵试验进行了ELISA反应条件优化,确定了重组蛋白抗原最佳包被量为3.0μg·孔-1;血清最佳稀释倍数为1:200,酶标二抗最佳工作浓度为1:4000,临界值分别为0.29和0.35.上述以NS4蛋白作为包被抗原建立的BTV抗体间接ELISA方法检测敏感性可达1:1600;批内和批间重复性变异系数均小于10％;检测76份重庆地区牛群血清样品,阳性符合率为98％,阴性符合率为100％.本研究建立的间接ELISA方法为临床BTV血清抗体检测及BTV血清流行病学调查奠定了基础.

    蓝舌病病毒NS4基因原核表达间接ELISA

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    2017-2019年华东地区猪场主要病毒性腹泻病原调查

    常新见周金柱殷杰牛贝贝...
    3141-3150页
    查看更多>>摘要：本研究旨在了解当前我国华东地区引起猪腹泻的主要病毒性腹泻病原的流行情况,为该地区更好地开展猪腹泻病毒的防控工作提供临床数据.分别采用RT-PCR检测方法对2017—2019年华东地区35个场别594份临床样品检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus of swine,TGEV)、猪丁型冠状病毒(porcine deltacorona-virus,PDCoV)和猪萨佩罗病毒(porcine Sapelovirus,PSV)等5种猪的病毒性腹泻病原,并对其阳性率及混合感染情况进行统计分析.结果显示,2017—2019年的PEDV、PDCoV、PoRV、TGEV及PSV的平均阳性率为分别为62.6％(372/594)、27.9％(166/594)、16.8％(100/594)、13.3％(79/594)及3.87％(23/594),二重混合感染中以PEDV+PDCoV及PEDV+PoRV为主,平均混合感染率分别为22.4％(133/594)和13.3％(79/594).三重感染中以PEDV+PoRV+PDCoV混合感染为主,感染率为7.58％(45/594),未见四重及五重病原混合感染.2017—2019年PEDV平均阳性检出率最高,且常与PoRV及PDCoV发生混合感染,是当前华东地区猪病毒性腹泻类疫病的防控重点.TGEV和PDCoV在健康育肥猪及母猪的检出率中占比较大,表明隐性感染变得普遍,值得养殖户关注.除此之外,PSV的检出率远低于其他4种腹泻病毒.总之,随着2018年后养殖场加强生物安全防控措施和猪群管理,各病原检出率和阳性场检出率呈现逐年下降趋势.

    猪病毒性腹泻PEDV混合感染华东地区

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    鸡Rab7b在细胞晚期内吞体定位和结合恒定链的分子特征

    陈芳芳谭红黎钱艳红桂亚萍...
    3151-3159页
    查看更多>>摘要：Rab蛋白是介导胞内活性蛋白转运的分子家族.恒定链(invariant chain,Ii)具有协助抗原肽转运、B细胞成熟和作为细胞因子的受体等免疫学功能.前期研究发现,鸡(Gallus gallus)Rab5a在细胞早期内吞体中与Ii结合,但不清楚是否还有其他转运蛋白有该特性.基于Rab7b分子定位于晚期内吞体,并与胞内分子转运相关,本研究探索了鸡Rab7b与Ii结合的分子结构特征.首先,用自行设计的引物扩增了鸡和小鼠(Mus musculus)Rab7b基因,并进行了氨基酸同源性比对分析;构建了含鸡Rab7b及其67位氨基酸突变体Rab7bQ67L的原核和真核重组质粒.其次,将含红色荧光蛋白和目的基因的重组质粒转染鼠巨噬细胞系Raw264.7,培养后用绿色荧光素(FITC)标记的鼠抗晚期内吞体蛋白1(LAMP1)抗体染色,观察目的蛋白在内吞体的定位.进一步将鸡Rab7b和Rab7bQ67L分别与Ii共转染293T细胞,观察它们与Ii的共定位.最后用拉下法和免疫印迹检测鸡Rab7b及Rab7bQ67L与Ii的结合.结果表明,所克隆获得的鸡Rab7b基因与预期大小一致,其开放阅读框为624 bp,编码208个氨基酸.鸡和鼠的Rab7b蛋白质结构相似性为74％.尽管鸡Rab7b和突变体Rab7bQ67L均能结合Ii,但只有Rab7b可以定位于晚期内吞体,而突变体却改变了该定位特性.综上所述,鸡Rab7b与Ii不仅在晚期内吞体共定位,而且还能互相结合;鸡Rab7b的第67位氨基酸影响其在细胞内定位而不影响与Ii结合.综上表明,Rab分子参与了Ii在细胞内细胞器的转运,为进一步研究Ii在细胞内的转运机制提供了新的途径.

    Ii晚期内吞体Rab7b突变共定位

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    猪β防御素-2对猪链球菌感染小鼠的治疗效果评价

    王安田黄靖宋炳晓孙瑜凡...
    3160-3170页
    查看更多>>摘要：防御素是一种广泛分布于动植物中的阳离子小肽,是哺乳动物先天性免疫防御系统的重要成分,具有广谱抗菌、抗病毒和抗真菌活性.猪β防御素-2(porcineβ-defensin-2,PBD-2)是猪表达的天然防御素之一,在体外具有良好的抗菌活性.本研究旨在评价PBD-2在动物体内对重要的人兽共患病原菌猪链球菌感染的治疗效果,为评估PBD-2成为治疗性药物的潜在价值提供依据.首先,在体外检测了PBD-2对猪链球菌临床分离菌株SC-19的杀菌活性,并且在鼠源巨噬细胞(RAW264.7)上检测了PBD-2的细胞毒性.随后,选取4～6周龄,体重在18～22 g的C57雌鼠,检测了PBD-2处理组和PBS对照组小鼠(n≥6)感染猪链球菌SC-19后的存活率、组织载菌量、炎性细胞因子水平和病理变化.结果表明,PBD-2(25～200μg·mL-1)可显著地抑制猪链球菌SC-19生长(P<0.05),且抑制作用随浓度升高而增强,同时,对RAW细胞无显著的毒性作用(P>0.05).在体内,PBD-2处理能有效降低小鼠感染猪链球菌SC-19后的死亡率,并且显著降低小鼠感染细菌后的脑、肺、脾组织和血液中的细菌载量,以及血清中炎性细胞因子IL-6、IL-12和T N F-α的水平(P<0.05).同时,PBD-2治疗也显著降低了小鼠感染细菌后肺和脾组织的病理变化程度(P<0.05).这些结果说明,PBD-2在体外具有良好的抗猪链球菌的活性,无显著细胞毒性,同时,在小鼠体内对猪链球菌感染具有治疗效果,提示,PBD-2具有进一步开发为治疗性药物的潜力.

    猪β防御素-2细菌感染治疗猪链球菌

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    苦马豆素抑制N-聚糖加工对生殖激素分泌功能的影响

    李中央王圣翔强煜云田甜...
    3171-3180页
    查看更多>>摘要：苦马豆素(SW)中毒可引起生殖激素分泌紊乱,其中,促性腺激素是糖蛋白,由N-聚糖糖基化修饰调控其活性和功能.SW是N-聚糖加工过程中ɑ-甘露糖苷酶的抑制剂,而SW如何通过改变N-聚糖加工过程进一步影响生殖激素的分泌功能尚不明确.因此,本试验建立SW染毒妊娠期小鼠模型,利用MALDI-TOF-MS质谱法检测糖蛋白N-聚糖糖链结构的变化,分析N-聚糖加工过程中糖基酶的活性和生殖激素水平及其受体蛋白表达量.随着SW染毒时间的延长,染毒组小鼠垂体前叶糖蛋白的5种复合型N-聚糖糖链结构消失,而新增加3种杂合型N-聚糖糖链结构;N-聚糖糖基转移酶和糖苷酶的活性均显著下降;进一步发现染毒组小鼠卵巢促性腺激素受体、雌二醇和孕酮受体蛋白表达量显著低于对照组,并且生殖激素分泌水平也出现显著下降.SW可显著抑制N-聚糖糖基酶的活性使糖蛋白上N-聚糖糖链结构发生改变,影响促性腺激素及其受体的活性,使其对下游类固醇激素分泌的调控作用失衡,最终导致小鼠妊娠期生殖激素分泌紊乱.

    苦马豆素N-聚糖糖基化修饰糖基酶促性腺激素类固醇激素

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    1株重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因组特征

    谭祥梅吴瑕陈鹏飞赵雄伟...
    3181-3186页
    查看更多>>摘要：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)不断发生变异,其防控难度也逐渐增加.为了及时监测PRRSV在自然感染背景下的遗传进化特点,本研究从上海某发病猪场的临床样品中分离获得1株PRRSV毒株,命名为SHpd1/2018株,并对其生物学特性和基因组序列进行分析.结果表明,该毒株基因组全长为15018 bp(不含poly A),不能被针对HP-PRRSV强毒HuN4株的Nsp2的单抗所识别,但其增殖特性与强毒HuN4株相似.序列分析表明,SHpd1/2018株与HP-PRRSV强毒株的相似性最高(与HuN4相似性为94.3％).重组分析结果显示,SHpd1/2018株是以HP-PRRSV-like为主要亲本毒株,NADC30-like为次要亲本毒株的重组病毒,两个重组断点nt 2002和nt 3205均位于Nsp2基因的高变区.研究证实SHpd1/2018株是1株发生变异重组的PRRSV分离株,该毒株是上海某猪场保育猪发病的主要原因.

    猪繁殖与呼吸综合征病毒SHpd1/2018生物学特性基因重组分析

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    1种检测新城疫病毒的微滴式数字PCR方法

    梅力王英超吴迪李月...
    3187-3192页
    查看更多>>摘要：本研究旨在构建一种新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的微滴式数字PCR方法(droplet digital PCR,ddPCR).以NDV F基因为靶基因,选取保守区域设计引物和探针,构建了NDV ddPCR.对ddPCR反应引物和探针浓度、退火温度进行了优化,并对该方法的灵敏度、特异性和重复性进行测定.试验结果表明,ddPCR的最佳引物和探针浓度分别为900和250 nmol·L-1,最佳的退火温度为55℃.ddPCR的线性良好,最低检测下限为1.8 copies·μL-1,与禽传染性支气管炎病毒等其他6种病毒无交叉反应,样本重复的变异系数为2.4％.结果提示,本研究建立的ddPCR方法灵敏度高、特异性强,可对新城疫病毒感染的临床样品进行定量检测.

    新城疫病毒数字PCR检测方法

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    常见耐药基因多重PCR方法的建立及用于禽致病性大肠杆菌耐药性监测

    张耀东朱红AFAYIBODossêhJeanAp?tre王瑶...
    3193-3198页
    查看更多>>摘要：本研究旨在建立β-内酰胺类、四环素类、氨基苷类、酰胺醇类、磺胺类抗菌药物耐药基因的多重PCR检测方法,用于耐药基因的快速检测.根据GenBank公布的上述5类抗菌药物的耐药基因序列,设计17对特异性引物.通过优化PCR体系和反应程序,建立4组耐药基因(cat+f loR+tetB+tetC;d f rA12+sul2+sul1+blaCTX-M+balTEM-1;aac3+aph3+aadA1+strB;tetA+cmlA+strA+sul3)的多重PCR反应体系.然后,检测多重PCR方法的特异性和敏感性.利用建立的多重PCR方法检测42株禽致病性大肠杆菌的耐药基因,同时,检测其耐药性,比较分析耐药基因和耐药表型之间的相关性.结果显示,建立的4组多重PCR体系可有效扩增出17个耐药基因片段,测序结果表明特异性较好.敏感性结果表明,4组多重PCR体系的菌液敏感性分别为103、104、104和105 CFU.禽致病性大肠杆菌分离株的耐药基因多重PCR和单重PCR检测结果一致,其携带的耐药基因和耐药表型的符合率为92.86％.本研究建立的耐药基因多重PC R方法能简便、快速地检测常见的耐药基因,可用于耐药基因的传播、流行调查.

    耐药基因多重PCR检测

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    基于UPLC-MS/MS技术研究濒死状态下新生羔羊血清代谢物变化

    程艳杨超许丽卫耿梅梅...
    3199-3204页
    查看更多>>摘要：基于流行病学的角度,旨在初步探索与新生羔羊疾病相关的代谢标识物.本研究采用病理对照试验设计,利用高效液相色谱串联质谱比较病危临死新生羔羊与健康新生羔羊(相同日龄)的血清代谢差异.结果显示:两组血清代谢物能得到较好区分,共鉴定出13种差异代谢物,KEGG富集分析显示,这些差异代谢物主要富集在氨基酸生物合成和代谢通路上.羔羊濒死过程中血清内源性代谢物发生明显改变,可为新生羔羊疾病诊断标识物的筛选和构建提供基础.

    新生羔羊代谢组学高效液相色谱串联质谱疾病诊断技术

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