查看更多>>摘要:目的:建立多次气管滴注博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的肺纤维化小鼠模型.方法:随机将C57BL/6J小鼠分为空白(control)组(5只)、BLM多次高剂量(BLM-MH)组(10只)、BLM多次中剂量(BLM-MM)组(8只)、BLM多次低剂量(BLM-ML)组(7只)、BLM单次中剂量(BLM-SM)组(6只);采用单次和多次气管滴注BLM的方法制备肺纤维化小鼠模型,并在第56天绘制生存曲线,收集肺组织,计算肺系数,观察苏木素-伊红(hematoxylin-eo-sin,H&E)和Masson染色的肺组织病理变化,检测羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量.利用GEO数据库筛选特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)患者的差异表达基因,并对差异基因进行KEGG通路富集分析,以确定与IPF发生相关的通路.通过Western blot检测各组小鼠肺组织中与IPF相关通路的变化.结果:BLM-MH组与BLM-MM组小鼠在第56天的生存率分别为50%和87.5%,其他组无死亡.与control组相比,模型组的肺系数显著升高(P<0.05或P<0.01),肺组织损伤、炎症水平和肺纤维化程度显著增加(P<0.05或P<0.01),HYP含量呈升高趋势.与BLM-SM组相比,BLM-MH组和BLM-MM组的肺泡炎、纤维化程度和HYP含量均显著升高(P<0.05或P<0.01).GEO数据库及京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析结果显示,细胞外基质-受体相互作用通路(extracellular matrix-receptor interaction pathway,ECM-RIP)可能参与IPF的发生.Western blot结果显示,与空白组相比,模型组肺组织中ECM-RIP通路相关蛋白,如磷酸化聚焦粘附激酶(phosphorylated focal adhesion kinase,p-FAK)和磷酸化Src蛋白(phosphorylated Src,p-Src)的表达水平均升高.与BLM-SM组相比,BLM-MH组小鼠肺组织中p-FAK和p-Src蛋白水平均显著升高(P<0.05).结论:多次气管滴注BLM建立的小鼠肺纤维化模型能够模拟肺纤维化的疾病特征,为IPF机制研究和药物开发提供了有价值的实验模型.