查看更多>>摘要:目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)核旁斑组装转录本1(NEAT1)通过调节细胞焦亡调控人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化的作用.方法 培养hBMSCs 7 d诱导细胞成骨分化,并分为对照组(常规培养)、成骨分化组(成骨分化诱导)、pcD-NEAT1组(转染NEAT1过表达质粒)、pcD-null组(转染NEAT1过表达质粒阴性对照)、成骨分化+CML组[成骨分化诱导联合NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)炎性小体激活剂(Nε)-羧甲基赖氨酸(CML)处理]、成骨分化+CML+pcD-NEAT1组(成骨分化诱导联合pcD-NEAT1与CML处理).经茜素红染色检测细胞矿化程度;碱性磷酸酶(ALP)活性检测试剂盒检测ALP活性;CCK-8检测各组细胞存活率,高倍镜下观察细胞形态变化.TUNEL实验检测细胞凋亡率.qRT-PCR检测NEAT1的表达.Western blot检测IL-1β、IL-18、NLRP3、cleaved-caspase 1(cleaved-CASP1)、gasdermin D、Runt-相关转录因子2(RUNX2)、ALP、骨桥蛋白(OPN)的表达.结果 与对照组比较,成骨分化组细胞的矿化程度增加,ALP活性升高(P<0.05),NEAT1和RUNX2、ALP、OPN蛋白表达均上调(P<0.05).与pcD-null组比较,pcD-NEAT1组细胞的矿化程度增加,ALP活性升高(P<0.05),NEAT1和RUNX2、ALP、OPN蛋白表达均上调(P<0.05).与成骨分化组比较,成骨分化+CML组细胞矿化程度减轻,ALP活性降低(P<0.05),细胞存活率降低(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),细胞膜出现破裂,细胞膨大变形,NLRP3 和IL-1β、IL-18、cleaved-CASP1、gasdermin D蛋白表达均显著上调(P<0.05),而RUNX2、ALP、OPN蛋白表达均显著下调(P<0.05).与成骨分化+CML组比较,成骨分化+CML+pcD-NEAT1组细胞矿化程度增加,ALP活性升高(P<0.05),RUNX2、ALP、OPN蛋白表达均显著上调(P<0.05),细胞存活率增加(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),细胞膜较完整且细胞形态正常,NLRP3和IL-1β、IL-18、cleaved-CASP1、gasdermin D蛋白表达均显著下调(P<0.05).结论 NEAT1过表达通过抑制NLRP3炎性小体介导的细胞焦亡促进hBMSCs的成骨分化.