查看更多>>摘要:旨在基于网络药理学研究加减异功散(modified Yigong powder,MYG)治疗脾虚证的分子机制,并分析MYG对模拟胃肠脾虚犬肠道菌群及Caco-2细胞黏膜屏障的影响,以及肠道菌群与黏膜屏障间的互作效应.利用网络药理学方法预测MYG治疗脾虚证的分子机制.试验采集3只(12±1)岁脾虚柯基犬粪样后,建立体外胃肠模拟体系,分为原始粪样组、胃肠模拟组和胃肠模拟加异功散组,并利用16S rDNA法检测各组菌群结构变化.再从胃肠模拟加异功散组中提取代谢产物,研究其对LPS诱导的Caco-2细胞黏膜屏障损伤模型的影响,细胞试验分为空白对照组、模型组、异功散代谢产物组,进行荧光素钠通透性测定,并利用qPCR检测Claudin-1、Occludin与ZO-1 mRNA表达量.进一步对MYG干预后的肠道菌群与Caco-2细胞黏膜屏障指标进行相关性分析.结果显示,MYG有76个活性成分和45个治疗脾虚证的潜在靶点,蛋白互作分析得40个关键靶点,GO富集得34个条目,KEGG富集得16条通路;在胃肠模拟体系中,与胃肠模拟组相比,胃肠模拟异功散组在门水平上,厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bac-teroides)和放线菌门(Actinobacteriota)丰度显著增加(P<0.05),变形菌门(Proteobacteria)丰度显著降低(P<0.05),在属水平上,梭杆菌属(Fusobacterium)、瘤胃球菌属([Ruminococcus]gnavus group)和布劳特菌属(Blautia)丰度显著增加(P<0.05),大肠杆菌-志贺菌属(Escherichia-Shigella)和柠檬酸杆菌属(Citrobacter)丰度显著降低(P<0.05),菌群的多样性指数也显著升高(P<0.05);在细胞试验中,与模型组相比,异功散代谢产物组Caco-2细胞黏膜通透性极显著降低(P<0.001),Claudin-1、Occludin与ZO-1 mRNA表达量极显著增加(P<0.001);通过相关性分析,发现菌群结构与黏膜屏障指标有一定相关性.综上,MYG可能通过槲皮素、花生四烯酸、柚皮素等76个活性成分,作用于TNF、IL6、IL18、CXCL8、AKT1等40个关键靶点,通过AGE-RAGE、FoxO、HIF-1等16条信号通路治疗犬脾虚证.此外,MYG的胃肠代谢产物能够上调紧密连接蛋白mRNA的表达量,降低黏膜通透性,修复黏膜屏障,这可能与MYG调节菌群结构有关.