查看更多>>摘要:目的 探究当归多糖(APS)对高糖诱导视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的影响,及其基于微小RNA-148a-3p/Smad家族成员2(miR-148a-3p/SMAD2)轴的作用机制.方法 将分别转染miR-148a-3p模拟物(mimics)、miR-148a-3p抑制剂(inhibitor)及其对照品mimics-NC、miR-NC的RGC,分为对照组(CG)、模型组(MG)、APS低剂量(APS-L)组、APS高剂量(APS-H)组、APS-H+miR-148a-3p对照品组(APS+miR-NC)、APS-H+miR-148a-3p抑制剂组(miR-148a-3p inhibitor),分别以相应的高糖和APS处理,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-148a-3p和SMAD2 mRNA表达水平,检测细胞活力、凋亡情况和氧化应激指标水平,Western Blot法检测SMAD2蛋白表达水平,双荧光素酶实验检测miR-148a-3p和SMAD2的靶向关系.结果 (1)miR-148a-3p/SMAD2表达:APS-L组、APS-H组、APS-H+miR-NC组中miR-148a-3p表达水平均高于MG组(tAPS-L=6.564、tAPS-H=10.542、tAPS-H+miR-NC=9.945,均P=0.000),SMAD2 mRNA表达水平低于MG组(tAPS-L=4.147,P=0.004;tAPS-H=6.464、tAPS-H+miR-NC=6.586,均P=0.000);APS-H+miR-148a-3p inhibitor组miR-148a-3p表达水平低于APS-H+miR-NC组(t=7.558,P=0.000),SMAD2 mRNA表达高于APS-H+miR-NC组(t=4.513,P=0.001),差异均有统计学意义.(2)细胞活力和凋亡率:APS-L组、APS-H组、APS-H+miR-NC组细胞活力高于MG组(tAPS-L=8.105、tAPS-H=11.509、tAPS-H+miR-NC=11.996,均P=0.000),细胞凋亡率低于MG组(tAPS-L=8.729、tAPS-H=15.690、tAPS-H+miR-NC=14.709,均P=0.000);APS-H+miR-148a-3p inhibitor组细胞活力低于APS-H+miR-NC组(t=10.212,P=0.000),细胞凋亡率高于APS-H+miR-NC组(t=12.247,P=0.000),差异均有统计学意义.(3)氧化应激:APS-L组、APS-H组、APS-H+miR-NC组乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)均低于MG组(LDH:tAPS-L=11.257、tAPS-H=18.770、tAPS-H+miR-NC=18.364,均 P=0.000;MDA:tAPS-L=11.121、tAPS-H=17.139、tAPS-H+miR-NC=17.768,均 P=0.000),超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)均高于MG组(SOD:tAPS-L=9.408、tAPS-H=14.833、tAPS-H+miR-NC=13.240,均P=0.000;GSH:tAPS-L=5.616、tAPS-H=12.080、tAPS-H+miR-NC=12.642,均P=0.000);APS-H+miR-148a-3p inhibitor组LDH和MDA均高于APS-H+miR-NC组(tLDH=15.121、tMDA=14.613,均P=0.000),SOD和GSH均低于APS-H+miR-NC组(tSOD=12.278、tGSH=8.912,均P=0.000),差异均有统计学意义..(4)凋亡蛋白:APS-L组、APS-H组和APS-H+miR-NC组SMAD2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱天冬酶-3(Caspase-3)表达低于MG组(SMAD2:tAPS-L=4.565、tAPS-H=8.042、tAPS-H+miR-NC=7.390,均 P=0.000;Bax:tAPS-L=4.916、tAPS-H=8.763、tAPS-H+miR-NC=8.336,均P=0.000;Caspase-3:tAPS-L=4.214、tAPS-H=10.201、tAPS-H+miR-NC=9.536,均P=0.000),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达高于MG组(tAPS-L=3.713,P=0.001;tAPS-H=10.108、tAPS-H+miR-NC=10.314,均P=0.000);APS-H+miR-148a-3p inhibitor组SMAD2、Bax、Caspase-3表达均高于APS-H+miR-NC组(tSMAD2=5.651、tBax=6.840、tCaspase-3=8.205,均P=0.000),Bcl-2表达低于APS-H+miR-NC组(t=9.283,P=0.000),差异均有统计学意义.(5)靶向关系:miR-148a-3p 与SMAD2的3'非翻译区存在结合位点.miR-148a-3p mimics和野生型SMAD2共转染组荧光素酶活性低于mimics-NC和野生型SMAD2共转染组,差异有统计学意义(t=12.781,P=0.000).结论 当归多糖可能通过上调miR-148a-3p、下调SMAD2,改善高糖诱导的RGC凋亡和氧化应激损伤.