查看更多>>摘要:观察白藜芦醇(resveratrol,Res)通过调控Hippo信号通路对卵巢低反应(poor ovarian response,POR)小鼠卵巢功能的保护作用,探析Res抑制卵巢细胞凋亡的可能机制.将筛选后动情周期规律的雌性小鼠随机分成空白组,模型组以及Res低、高剂量组(20、40 mg·kg-1),每组20只.空白组给予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃,模型组以及Res低、高剂量组小鼠给予雷公藤多苷混悬液(50 mg·kg-1)灌胃2周,造模完成后,Res低、高剂量组小鼠连续灌胃治疗2周,空白组和模型组给予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃,于治疗结束次日对各组雌鼠进行促排操作.最后每组随机选取12只雌鼠进行取材,将每组剩余的8只雌鼠与雄鼠1∶1合笼.采用阴道脱落细胞涂片观察小鼠的动情周期变化,检测小鼠获卵数、卵巢湿重、卵巢指数和妊娠率,通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清中抗缪勒管激素(anti-Mullerian hormone,AMH)、促卵泡生成素(follicle-stimulating hormone,FSH)、雌二醇(estradiol,E2)、促黄体生成激素(luteinizing hormone,LH)的含量;通过苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和脱氧核苷酸转移酶dUTP末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling,TUNEL)染色法观察卵巢组织形态和卵巢细胞凋亡情况;通过免疫组化法检测Yes相关蛋白(Yes-asso-ciated protein,YAP)1 和带有 PDZ 结合基序的转录共激活因子(transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,TAZ)的蛋白表达,通过Western blot法检测哺乳动物Ste-20样激酶(mammalian sterile 20-like kinase,MST)1/2、大型肿瘤抑制因子(large tumor suppressor,LATS)1/2、YAP1、TAZ、B 淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2 关联 X的蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)蛋白表达水平的变化.结果发现,与空白组比较,模型组小鼠动情周期紊乱率升高,卵巢组织各级正常发育卵泡数量减少,闭锁卵泡增多,卵巢颗粒细胞凋亡量提高,获卵数下降,卵巢湿重与卵巢指数降低,血清中FSH和LH含量升高,AMH和E2含量下降,卵巢组织YAP1、TAZ蛋白表达水平降低,MST1/2、LATS1/2和Bax蛋白相对表达升高,YAP1、TAZ和Bcl-2蛋白相对表达降低,合笼后每胎胚胎数显著降低;与模型组比较,Res低、高剂量组小鼠动情周期紊乱率降低,卵泡数量和形态得到不同程度改善,卵泡闭锁量降低,卵巢颗粒细胞凋亡程度得到改善,获卵数升高,卵巢湿重与卵巢指数升高,血清中FSH和LH含量降低,AMH和E2含量升高,卵巢组织YAP1、TAZ蛋白表达水平升高,MST1/2、LATS1/2和Bax蛋白相对表达降低,YAP1、TAZ和Bcl-2蛋白相对表达升高,合笼后每胎胚胎数不同程度升高.综上,Res可以有效抑制小鼠卵巢细胞凋亡,改善卵巢反应性,其机制可能与调节Hippo通路中的关键分子有关.