查看更多>>摘要：目的 探讨不同天数饮用含胃蛋白酶的盐酸(PH=3)的豚鼠建立反流性食管炎模型的效果,并确定最佳天数的新型建模方法.方法 将40只3～4周龄的SD雄性豚鼠采用随机数字表法分为对照组、14 d模型组、21 d模型组、28 d模型组、35 d模型组,每组各8只.适应性饲养7 d后开始造模,其中对照组予以饮用无菌水,500 ml/d,连续28 d.模型组予以饮用含0.5％胃蛋白酶的0.1 mol/L盐酸(HCl),PH=3 500ml/d,分别连续14、21、28、35 d.每天观察各组豚鼠的一般状况、体重变化.取材后记录食管组织肉眼状态,行苏木精-伊红(HE)染色组织病理学观察.各组豚鼠食管组织通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)和闭合蛋白(Occludin)的mRNA相对表达量.同时蛋白质印迹法(Western blot)检测ZO-1、Occludin的蛋白表达.两组间比较采用t检验.结果 相较于对照组,各模型组的豚鼠活动力下降、体重增长缓慢,部分出现腹泻及皮疹.大体形态观察可见各模型组豚鼠的食管组织不同程度的黏膜充血,未见明显糜烂灶.光镜下可见各模型组食管黏膜出现不同程度早期炎症损伤,28 d模型组和35 d模型组可见明显的食管黏膜增厚、炎性细胞浸润、鳞状上皮细胞过度增生、固有层乳头延长等食管炎的表现.随着造模时间的延长,模型组豚鼠食管组织中炎性因子表达增加、黏膜屏障功能受损.从Western blot结果可见,21d、28、35 d模型组的连接蛋白ZO-1的蛋白表达水平均低于对照组(0.612±0.051比1.000±0.157、0.508± 0.068 比 1.000±0.157、0.514±0.094 比 1.000±0.157,t=4.076、4.979、4.597,P＜0.05).14、21、28、35 d模型组的连接蛋白Occludin的蛋白表达水平均低于对照组(0.758±0.120比1.000± 0.089、0.725±0.093 比 1.000±0.089、0.444±0.054 比 1.000±0.089、0.443±0.099 比 1.000± 0.089,t=2.802、3.699、9.259、7.239,P＜0.05).从 RT-PCR 结果可见,28、35 d 模型组的连接蛋白ZO-1 的 mRNA 表达水平均低于对照组(0.115±0.066 比 1.208±0.796、0.130±0.038 比 1.208± 0.796,t=4.105、4.056,P＜0.05).14、21、28、35 d模型组的连接蛋白Occludin的蛋白表达水平均低于对照组(0.679±0.148 比 0.978±0.098、0.551±0.227 比 0.978±0.098、0.242±0.167 比0.978±0.098、0.126±0.103 比 0.978±0.098,t=4.837、4.884、11.196、16.894,P＜0.05)o 28、35 d模型组中炎性因子IL-6的mRNA表达水平均高于对照组(10.985±5.300比1.033±0.284、17.192± 11.321 比 1.033±0.284,-5.625、-4.281,P＜0.05).28、35 d 模型组中炎性因子 TNF-α 的mRNA 表达水平均高于对照组(7.565±2.729 比 1.014±0.182、13.190±5.530 比 1.014±0.182,t=-5.449、-4.920,P＜0.05).14、21、28、35d模型组的抗炎因子IL-10的mRNA表达水平均低于对照组(0.486±0.273 比 1.010±0.150、0.309±0.206 比 1.010±0.150、0.190±0.171 比 1.010± 0.150、0.215±0.126 比 1.010±0.150,t=5.043、8.253、10.822、12.203,P＜0.05).结论 通过豚鼠自发性饮酸可以成功建立反流性食管炎模型,并且28 d造模时间是最佳的选择,为后续研究奠定基础.
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