查看更多>>摘要:目的 探讨含WW结构域的转录因子1(WWTR1或TAZ)在创伤后骨性关节炎(PTOA)中对软骨细胞的调控作用.方法 由贵州医科大学动物实验中心提供20只c57bl/6J小鼠简单随机法分为假手术组(Sham)组、内侧半月板(DMM)不稳定组,每组6例,3个月后取材.苏木精-伊红(HE)染色和番红O固绿(Safranin O)染色验证模型是否构建成功和根据国际骨关节炎研究学会(OARSI)对骨关节软骨损伤进行分级,免疫组织化学法检测TAZ的表达.分离培养膝关节原代软骨细胞,将其分为对照组(Control)和TAZ抑制组(TAZ inhibitor-1)进行体外实验.通过免疫荧光检测TAZ inhibitor-1对TAZ表达的影响.蛋白质印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测TAZ inhibitor-1对软骨细胞合成和分解代谢相关因子表达的影响.组间比较采用t检验.结果 HE结果显示,DMM组滑膜比对照组有增厚和有炎性细胞浸润.Safranin O染色显示,根据OARSI评分DMM组关节软骨浅层比对照组有降解和软骨下骨增厚[(4.333±1.731)分比(1.000±0.167)分,t=21.240,P<0.01].免疫组织化学结果显示,DMM组TAZ表达低于对照组(63.333±2.667 比 44.500±1.500,t=19.210,P<0.01).在体外实验中,免疫荧光结果显示,TAZ inhibitor-1 组软骨细胞内 TAZ 的表达低于对照组(44.406±1.731 比 54.772±5.419,t=15.860,P<0.01)o Western blot 结果显示,TAZ inhibitor-1 组二型胶原酶 I(Col2a1)、糖胺聚糖(ACAN)表达低于对照组(0.470±0.038 比 0.937±0.330,0.589±0.015 比 0.859±0.037,t=20.830、17.160,P<0.01),TAZ inhibitor-1组基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、含TSP样基序的去整合素金属蛋白酶(ADAMTS)-7 表达高于对照组(0.897±0.004 比 0.540±0.018、0.956±0.007 比 0.605±0.013,t=4.920、8.056,P<0.01).qPCR 结果显示,TAZ inhibitor-1 组 MMP-13、ADAMTS-7、SOX5 等基因表达高于对照组(1.697±0.030 比 1.000±0.007、5.242±0.343 比 1.000±0.031、0.769±0.018 比1.000±0.030,t=22.820、23.820、12.270,P<0.01),TAZ inhibitor-1 组 CO12a1、ACAN、刺猬因子重组蛋白(IHH)等基因表达低于对照组(0.524±0.047 比 1.001±0.069、0.664±0.310 比 1.001±0.624、0.367±0.024 比 1.002±0.085,t=10.580、8.875、13.660,P<0.01).结论 TAZ 在软骨细胞中通过调节软骨细胞的代谢促进PTOA的发生发展.