查看更多>>摘要：目的 观察研究穗花杉双黄酮(AMF)在体外对人胃癌细胞株增殖、侵袭、迁移、粘附的影响,并探讨其作用机制.方法 选择BGC-823 人胃癌细胞株进行相关试验,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测AMF对BGC-823 细胞增殖的影响,Transwell侵袭试验观察AMF对BGC-823 细胞侵袭的影响,细胞划痕试验观察AMF对BGC-823 细胞迁移的影响,细胞粘附试验观察AMF对BGC-823 细胞粘附能力的影响,并采用Western bol法检测AMF对与BGC-823 细胞侵袭、迁移、粘附相关的基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9 及伴有Kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)表达,以及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路中PI3K、p-PI3K、Akt及p-Akt蛋白表达的影响.结果 MTT试验结果显示,50、100、200、400 μmol/L浓度的AMF对BGC-823 细胞增殖均有抑制作用,与 1‰二甲基亚砜(DMSO)组及空白对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),且随AMF浓度的增加抑制率逐渐升高,呈现浓度依赖性关系(P＜0.05).Transwell侵袭试验结果显示,与空白对照组相比,AMF 100、200、400 μmol/L浓度组侵袭过去的细胞数目均明显低于空白对照组(P＜0.05),且随AMF浓度的增加侵袭细胞数目逐渐减少(P＜0.05),呈显浓度依赖关系.细胞划痕试验结果显示,与空白对照组相比,AMF 100、200、400 μmol/L浓度组迁移至划痕区域内的BGC-823 细胞数目均少于空白对照组(P＜0.05),且随着AMF浓度增加迁移细胞数目逐渐减少(P＜0.05),呈浓度依赖关系.细胞粘附试验结果显示,AMF 100、200、400 μmol/L浓度组的AMF作用于BGC-823 细胞20、40、60、80 min后,各浓度组在各时间点粘附于纤维粘连蛋白(FN)胶上的细胞数均低于空白对照组(P＜0.05),且随着AMF浓度的增加,细胞粘附抑制率越大,随着作用时间的增加,细胞粘附抑制率亦越大,呈浓度、时间依赖关系(P＜0.05).Western bolt条带分析显示,与空白对照组比较,AMF 100、200、400 μmol/L浓度组的RECK蛋白表达量均高于空白对照组(P＜0.05),MMP-2 及MMP-9 蛋白表达量均低于空白对照组(P＜0.05),且随着AMF浓度的增加RECK蛋白表达量明显增高,MMP-2 及MMP-9 蛋白表达量明显降低,呈浓度依赖关系(P＜0.05);与空白对照组比较,AMF 100、200、400 μmol/L 浓度组的 p-Akt 及p-PI3K蛋白表达量均低于空白对照组(P＜0.05),且随AMF浓度的增加表达量明显降低,呈浓度依赖关系(P＜0.05).结论 AMF能抑制BGC-823 人胃癌细胞株的增殖、侵袭、迁移、粘附能力,其机制可能与促进RECK蛋白表达,下调MMP-2 及MMP-9 蛋白表达,并抑制PI3K及Akt蛋白磷酸化从而抑制PI3K/Akt信号通路表达有关.
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