查看更多>>摘要:目的 探讨电针"肠病方"对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠细胞自噬水平的调控作用.方法 将40只雄性SD大鼠随机分为5组:正常对照组(正常组),UC模型组(模型组),电针治疗组(电针组),雷帕霉素(RAPA)溶液干预组(RAPA组),3-甲基腺嘌呤(3-MA)溶液干预组(3-MA组),每组8只大鼠.正常组大鼠给予正常饮食,其余4组大鼠采用5%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液建立UC大鼠模型.造模成功后,电针组大鼠采用电针刺激大鼠"中脘"及双侧"天枢"、"上巨虚"五个穴位,疏密波,频率10 Hz/50 Hz,强度以大鼠肢体轻微颤动,电针20 min.RAPA组大鼠腹腔注射2 mg/kg RA-PA 溶液,3-MA组大鼠腹腔注射1.5 mg/100 g 3-MA溶液.测量大鼠体质量、结肠长度,计算疾病活动指数(DAI)评分,并取各组大鼠血清及结肠组织,通过HE染色观察大鼠结肠形态学变化;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-2、IL-10含量;超微电镜观察大鼠结肠黏膜上皮细胞超微结构;Western blot法检测自噬相关蛋白(ATG)5、ATG 12、LC3和p 62蛋白相对含量;实时荧光定量PCR(qPCR)检测ATG5、ATG 12、LC 3和p62 mRNA含量.结果 与正常组相比,模型组、3-MA组大鼠DAI评分分值增加,结肠长度缩短,血清中IL-2、IL-10水平降低,TNF-α、IL-6水平增加,结肠组织中ATG5、ATG 12、LC 3相对蛋白表达含量及该基因mRNA的相对含量显著降低,p 62相对蛋白表达含量及其基因mRNA的相对含量显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,电针组和RAPA组大鼠DAI评分分值下降,结肠长度增加,血清中IL-2、IL-10水平升高,TNF-α、IL-6水平降低,结肠组织中ATG5、ATG 12、LC 3相对蛋白表达含量及该基因mRNA的相对含量显著升高,p 62相对蛋白表达含量及其基因mRNA的相对含量显著降低(P<0.05,P<0.01);与电针组相比,3-MA组大鼠DAI评分分值增加,结肠长度缩短,血清中IL-2、IL-10水平降低,TNF-α、IL-6水平升高,结肠组织中ATG5、ATG 12、LC 3相对蛋白表达含量及该基因mR-NA的相对含量显著降低,p 62相对蛋白表达含量及其基因mRNA的相对含量显著升高(P<0.05,P<0.01).结论 电针"肠病方"能够促进溃疡性结肠炎大鼠结肠细胞的自噬水平.