查看更多>>摘要:目的 探讨蛇葡萄素诱导人宫颈癌SiHa细胞发生自噬与凋亡的影响.方法 设置对照组、3-MA(5 mmol/L)组、Z-VAD-FMK(50μmol/L)组、蛇葡萄素(80μmol/L)组、3-MA+蛇葡萄素组、Z-VAD-FMK+蛇葡萄素组,依次给药培养24 h,MTT法检测细胞增殖抑制率;设置对照组、3-MA(5 mmol/L)组、蛇葡萄素(80μmol/L)组、3-MA+蛇葡萄素组,依次给药培养24 h,电子显微镜下观察细胞形态变化,Hoechst33258和Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡情况;设置对照组、Z-VAD-FMK(50μmol/L)组、蛇葡萄素(80μmol/L)组、Z-VAD-FMK+蛇葡萄素组,依次给药培养24 h,MDC法和透射电子显微镜观察自噬和细胞超微结构变化;设置对照组、3-MA(5 mmol/L)组、蛇葡萄素(80μmol/L)组、3-MA+蛇葡萄素组或对照组、Z-VAD-FMK(50μmol/L)组、蛇葡萄素(80μmol/L)组、Z-VAD-FMK+蛇葡萄素组,依次给药培养12 h,Western blot法检测cleaved-PARP、cleaved-Caspase3、Bax、Bcl-2、Atg13、Beclin-1、LC3、P62蛋白表达.结果 与对照组比较,蛇葡萄素对SiHa和C-33A细胞的增殖抑制作用均增强(P<0.01);与蛇葡萄素组比较,3-MA+蛇葡萄素、Z-VAD-FMK+蛇葡萄素对2种细胞的增殖抑制作用增强更显著(P<0.01),且活细胞数减少.与蛇葡萄素组比较,3-MA+蛇葡萄素组SiHa细胞中亮蓝色荧光增多,凋亡率升高(P<0.05),cleaved-PARP、Bax、P62蛋白表达升高(P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.01).与蛇葡萄素组比较,Z-VAD-FMK+蛇葡萄素组SiHa细胞中绿色点状荧光、自噬小体和自噬溶酶体数量均增多,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、Atg13、Beclin-1蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),P62、cleaved-PARP、cleaved-Caspase3蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01).结论 蛇葡萄素可诱导宫颈癌SiHa细胞自噬和凋亡,两者呈相互拮抗关系,且Beclin-1/Bcl-2可能为其关键作用靶点.