查看更多>>摘要:目的:正交试验法优选干姜的乙醇回流提取工艺,分析鉴定干姜的化学成分,利用网络药理学、分子对接和实验验证研究策略,探讨干姜治疗急性肺损伤(AU)的药效物质及作用机制.方法:以6-姜辣素含量和出膏率为指标,采用正交试验筛选乙醇浓度、溶剂倍量、提取时间和提取次数的最优水平,并进行验证.利用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)在正、负离子模式下对干姜中化学成分进行定性分析;再对鉴定出来的化学成分进行网络药理学分析,获得干姜治疗ALI的核心成分、关键靶点和相关通路,采用分子对接技术验证核心成分与靶点蛋白的结合活性.通过脂多糖(LPS)诱导建立ALI模型,通过计算肺系数、观察肺组织切片来评估肺的损伤程度,测定小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子和氧化应激指标的含量,Western blot法检测肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)及p-AKT1的蛋白表达.结果:最佳提取工艺为干姜加10倍量80%乙醇加热回流提取3次,每次1 h.通过LC-MS技术分析得到干姜提取液中45种化学成分,筛选后得到活性成分31个,与ALI疾病交集的靶点有139个.KEGG富集分析中共得到154条信号通路,如磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路、Ras信号通路等,大多与调节免疫性炎症有关.分子对接结果验证核心成分与关键靶点有较好结合力.HE染色结果显示,与正常对照组相比,模型对照组肺泡结构紊乱,肺泡间隙明显增宽并伴大量中性粒细胞和淋巴细胞浸润,肺系数明显升高(P<0.01),TNF-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β的含量显著升高(P<0.01),髓过氧化物酶(MPO)含量显著升高(P<0.01),超氧化物歧化酶(SOD)含量明显降低(P<0.05),肺组织中TNF-α及p-AKT1蛋白表达显著上调(P<0.01);与模型对照组相比,各给药组小鼠肺组织结构损伤均有所减轻,中性粒细胞及炎性细胞浸润减少,肺系数明显降低(P<0.05),TNF-α、IL-6、IL-1β、MPO、丙二醛(MDA)含量明显降低,SOD含量明显升高,肺组织中TNF-α及p-AKT1蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01).结论:干姜提取液对ALI的治疗作用显著,其作用机制可能与下调小鼠肺组织TNF-α及p-AKT1的蛋白表达,缓解炎症反应和氧化应激有关.