查看更多>>摘要:目的 旨在阐明芪参颗粒(Qishen Granules,QSG)调控线粒体自噬,干预炎症小体活化抗心肌细胞损伤的作用机制.方法 培养HL-1心肌细胞,通过血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,AngⅡ)诱导心肌细胞损伤模型,将细胞分为对照组、模型组,QSG 2.5%、5%、10%组,QSG组分别给予2.5%、5%、10%QSG含药血清MEM培养基培养细胞,对照组及模型组给予10%普通大鼠血清MEM培养基培养,培养6 h后,每组细胞加入150 nmol/L Ang Ⅱ孵育24 h.采用CCK8法检测QSG含药血清对HL-1细胞活力的影响,采用比色法测定各组乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(Super Oxide Dismutase,SOD)水平,Western Blot 法检测 QSG 含药血清对HL-1细胞NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体活化以及线粒体自噬水平的影响,检测NLRP3 及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(Cysteinyl Aspartate Specific Protease-1,Caspase-1)、白细胞介素-1β(Interleukin-1 beta,IL-1β)蛋白表达水平及 PTEN 诱导激酶 1(PTEN-induced putative kinase 1,PINK1)、帕金森蛋白2,E3 泛素蛋白连接酶(Parkinson Protein 2,E3 Ubiquitin Protein Ligase,Parkin)、隔离蛋白 1(Sequestosome-1,P62)蛋白表达水平,免疫荧光法观察各组心肌细胞NLRP3及微管相关蛋白1轻链3(Microtubule-Associated Protein 1 Light Chain 3,LC3)表达情况.结果 与模型组比较,QSG含药血清各剂量组细胞活力显著增强(P<0.01,P<0.05);与假手术组相比,模型组LDH、MDA水平显著升高,SOD水平显著降低(P<0.01),与模型组比较,QSG含药血清各剂量组LDH及MDA表达显著降低,SOD水平显著升高(P<0.01或P<0.05);与对照组比较,模型组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、P62蛋白表达水平显著升高(P<0.01),PINK1、Parkin蛋白表达水平显著降低(P<0.01),与模型组比较,QSG含药血清各剂量组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、P62蛋白表达水平显著降低(P<0.01或P<0.05),PINK1、Parkin蛋白表达水平显著升高(P<0.01或P<0.05).荧光染色结果显示,与对照组比较,模型组心肌细胞内NLRP3及LC3表达升高,与模型组比较,QSG组心肌细胞内NLRP3、LC3表达水平降低.结论 QSG能有效保护心肌细胞损伤,其作用机制可能是通过调控线粒体自噬干预炎症小体活化实现的.