查看更多>>摘要:目的 探讨脊髓自噬在电针减轻大鼠神经病理性疼痛(Neuropathic pain,NP)中的作用.方法 选择健康成年雄性SD大鼠 60 只,体重 280~350 g,使用随机数字表法,将 60 只大鼠随机均分为 5 组(n=12):假手术组(S组)、神经病理性疼痛模型组(NP组)、电针组(EA组)、三甲基腺嘌呤组(MA组)和电针+三甲基腺嘌呤组(EM组).NP组、EA组、MA组和EM组进行脊神经结扎术(Spinal nerve ligation,SNL)制备神经病理性疼痛大鼠模型,S组仅予以暴露脊神经但不结扎.EA组于NP建模7d后开始给予电针刺激,每次持续 30 min,每天 1 次,连续 7 d;MA组于NP建模当天至NP建模后 7d每天鞘内给予 10 μL三甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA),连续给药 7 d;EM组于建模当天至建模后 7d每天鞘内给予 10 μL三甲基腺嘌呤,连续给药 7d,同时在连续给药 7d结束后予以电针刺激,每天 1 次,每次持续 30 min,连续 7 d;S组和NP组鞘内给予等剂量的二甲亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO),但不予以电针刺激.于NP建模前 1 d(T0)和NP建模后 1、3、7、10、14 d(T1~T5)分别测定大鼠疼痛行为学指标机械缩足反射阈值(Mechanical withdrwal threshold,MWT)和热缩足反射潜伏期(Thermal with-drawal latency,TWL);并在SNL术后 14d进行行为学测试后处死大鼠,取脊髓L4~L6 段,通过电镜观察分析各组大鼠脊髓背角自噬小体的形态和数量;使用Western blot检测大鼠脊髓组织LC3Ⅱ、Beclin 1 及p62 蛋白表达水平;采集尾静脉血样,使用Elisa法测定血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)的浓度.结果 与S组比较,NP组大鼠建模 3d后MWT降低,TWL缩短,脊髓组织LC3Ⅱ及Beclin 1 蛋白表达水平上调,p62 表达水平下调,自噬小体数量增加,血清IL-6 和TNF-α浓度均升高(P<0.05);与NP组比较,EA组大鼠建模 3d后MWT升高,TWL延长,脊髓组织LC3Ⅱ及Beclin 1 蛋白表达水平上调,p62 蛋白表达水平下调,自噬小体数量增多,血清IL-6 和TNF-α浓度均降低(P<0.05);与EA组比较,EM组大鼠建模 3d后MWT降低,TWL缩短,脊髓组织LC3Ⅱ及Beclin 1 蛋白表达水平下调,p62 表达水平上调,自噬小体数量减少,血清IL-6 和TNF-α浓度均升高(P<0.05).结论 电针可减轻大鼠NP,其机制与诱导脊髓自噬和抑制炎性反应有关.