查看更多>>摘要:目的:探究微血管内皮细胞来源的外泌体对血管性痴呆(VD)模型小鼠脑血管形及神经损伤修复的影响.方法:采用超高速离心法提取小鼠脑微血管内皮细胞 bEnd.3的外泌体,透射电子显微镜(TEM)观察外泌体形态,纳米颗粒追踪分析(NTA)测定外泌体径粒分布情况,蛋白质免疫印迹法(Western Blot)测定外泌体标志蛋白 CD63、TSG101、Alix表达;将 40 只小鼠按照随机数字表法分为假手术(Sham)组、模型(Model)组、外泌体(b-Exo)组、阳性对照(DP)组,每组 10 只,除假手术组,其余 3 组小鼠均采用双侧颈总动脉缩窄法构建 VD模型,b-Exo组腹腔注射 100 μL的 b-Exo(100 μg/mL),DP组腹腔注射盐酸多奈哌齐(1 mg/kg),假手术组和模型组腹腔注射等体积生理盐水,每日 1次,持续 28 d;Morris水迷宫行为学实验分析小鼠学习记忆能力,苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠海马组织病理学变化,免疫荧光染色检测小鼠脑组织血管形成情况,Western Blot检测小鼠海马组织中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平,免疫荧光染色检测小鼠海马组织中神经元特异核蛋白(NeuN)表达,酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠血清脑损伤相关因子星形胶质源性蛋白(S-100β)与神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平.结果:从 bEnd.3 细胞分离的颗粒物呈圆形囊泡状,CD63、TSG101及 Alix蛋白均高表达,说明该颗粒物为外泌体,记为 b-Exo;与假手术组比较,模型组小鼠逃避潜伏期延长,通过目标象限次数和在目标象限停留时间百分比减少,海马 CA1 区神经元细胞数量减少,出现明显病理学损伤,血管形成减少,VEGF蛋白相对表达量下调,NeuN表达减少,血清 S-100β与 NSE水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,b-Exo组和 DP组小鼠逃避潜伏期缩短,通过目标象限次数和在目标象限停留时间百分比增加,海马 CA1区损伤明显减轻,神经元细胞数量有所增加,血管形成增加,VEGF蛋白相对表达量上调(P<0.05),NeuN表达增加,同时,血清中 S-100β与 NSE水平降低(P<0.05).结论:微血管内皮细胞来源的外泌体能明显促进 VD小鼠的血管形成,并修复神经损伤,对 VD小鼠起到治疗作用.