查看更多>>摘要:目的:基于miR-155/-146α调控p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 Mitogen-activated Protein Kinase,p38 MAPK)信号通路探讨电针治疗膝骨性关节炎的作用机制.方法:体内体外模型诱导鉴定后,采用番红O-固绿及苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色观察软骨组织形态学改变,酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Method,ELISA)检测血清炎性因子白细胞介素(Interleukin,IL)-6、IL-1 β、肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)-α的表达,qPCR 及 Western blot 检测软骨组织和细胞中miR-155、miR-146α mRNA转录水平和p38 MAPK蛋白表达情况,Tunel染色、流式细胞术、激光共聚焦显微镜观察软骨细胞凋亡情况.结果:①micro-CT显示:正常组关节面平整,边缘光滑圆润,模型组关节面粗糙,边缘不规则;Collagen Ⅱ免疫细胞化学染色显示:空白组软骨细胞胞浆呈棕黄色,胞核呈蓝紫色,与空白组比较,模型组软骨细胞胞浆棕黄色颜色变浅.②番红O-固绿和HE染色显示:与正常组比较,模型组结构紊乱,软骨表面粗糙,可见部分磨损、缺失,软骨细胞排列杂乱无序;与模型组比较,电针组明显改善,四层结构清晰,软骨表面光滑,软骨细胞排列整齐有序.③ELISA结果显示:与正常组比较,模型组IL-6、IL-1β、TNF-α促炎细胞因子显著增加;与模型组比较,电针组IL-6、IL-1β、TNF-α的表达有效减少(P<0.05).④在软骨组织中,与正常组比较,模型组miR-155、miR-146α mRNA和p38MAPK蛋白表达显著增高,与模型组比较,电针组有效抑制了 miR-155、miR-146α mRNA及p3 8 MAPK蛋白表达(P<0.05);在软骨细胞中,与空白组比较,模型组miR-155、miR-146α mRNA和p3 8 MAPK蛋白表达显著增高,与模型组比较,电针组和抑制剂组有效抑制了 miR-155、miR-146α mRNA及p38MAPK蛋白表达(P<0.05).⑤软骨组织Tunel染色显示:与正常组比较,模型组软骨组织细胞核皱缩数量增多,凋亡细胞显著增多;与模型组比较,电针组细胞核皱缩数量减少,凋亡减少.流式细胞检测及激光共聚焦显微镜显示:与空白组比较,模型组软骨细胞凋亡和细胞色素C蛋白表达显著增多,电针组和抑制剂组均有效抑制了细胞凋亡和细胞色素C蛋白表达(P<0.01).结论:电针可以改善软骨退变、抑制炎症从而减轻凋亡,其具体机制与介导miR-155/-146α调控p38 MAPK信号通路有关.