查看更多>>摘要:本研究2021年9月从甘肃规模化猪场采集疑似感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的仔猪肺脏组织和血清,经(Open Reading Frame 5,ORF5)基因分型 RT-PCR扩增测序鉴定,阳性样品进行病毒分离.经间接免疫荧光试验和感染细胞病理电镜切片鉴定分离毒株,采用RT-PCR方法对PRRSV分离株进行全基因组序列扩增,利用生物学软件分析其遗传演化特征,同时也对该场107份猪血清样本检测.研究结果显示,ORF5基因分型RT-PCR扩增测序结果表明,该猪场为NADC34-likc-PRRSV感染;间接免疫荧光显示能够与PRRSV N蛋白单克隆抗体(SR30)反应,电镜观察到感染细胞中直径大小为50-80 nm病毒粒子,其基因组全长大小为15 078 bp,将分离株命名为PRRSV GSJT/9/2021株.分离株与不同谱系代表株VR-2332、JXA1、HuN4、NADC30 和 NADC34 的全长核苷酸序列同源性分别为 85.2%、86.4%、86.5%、88.7%和85.9%;ORF5基因序列与代表毒株ORF5基因序列及编码氨基酸序列的相似性分别为83.7%~94.9%与84.6%~95.5%,其中与IA/2014/NADC34毒株的核苷酸和氨基酸同源性较高分别为94.9%和95.5%;基于GSJT/9/2021全基因组和ORF5基因分别构建进化树对分离株进行分型,结果显示GSJT/9/2021的全基因组与类NADC30毒株亲缘关系较近,属于同一个分支,而ORF5基因遗传进化树表明GSJT/9/2021毒株与类NADC34毒株亲缘关系最近;ORF5氨基酸序列分析结果显示,ORF5的变异程度最大,GP5蛋白中4个糖基化位点与国内流行的NADC34毒株相比额外增加一个糖基化位点第57位,在诱骗表位37-45 aa中第38、39位出现独特突变(H38Q,L39F);Nsp2氨基酸序列分析结果显示,Nsp2蛋白存在"111+1+19a"(323-433位、483位、504-522位)缺失模式,与NADC30毒株缺失模式一致;重组分析表明GSJT/9/2021株由NADC30-like PRRSV、HUN4与IA/2014/NADC34之间发生重组变异而来,重组位点分别位于Nsp4、Nsp9、GP2a和M的氨基端.107份血清的PRRSV N蛋白抗体阳性率达98.2%.综上,PRRSV GSJT/9/2021株是1株多谱系重组变异NADC34-like-PRRSV,通过深入解析重组毒株的遗传变异和生长特性,为甘肃地区防控PRRS具有重要的指导意义.