查看更多>>摘要:目的 观察麝香保心丸(Shexiang baoxin pill,SBP)对缺血/再灌注损伤(Ischemia/reperfusion injury,I/R)大鼠心肌组织的保护作用及与自噬的调节关系.方法 采用左冠状动脉前降支缺血再灌注建立I/R模型.将Sprague-Dawley(SD)大鼠30只按随机数字表法分为对照组、模型组及SBP组,每组各10只.通过心脏超声多普勒检测大鼠不同时期左心室射血分数(Left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室缩短分数(Fractional shorten-ing,FS)、左室舒张末期内径(Left ventricular end diastolic diameter,LVIDd)和左心室收缩期内径(Left ventricular end systolic dimension,LVIDs)的变化,HE染色观察心肌组织病理改变,TUNEL染色检测细胞凋亡情况,采用qRT-PCR方法检测白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)和自噬相关基因(Autophagy-related genes,ATG)、BCL-2 关联 X 蛋白(BCL-2 associated X protein,Bax)和 B 淋巴细胞瘤-2 基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)的表达水平.采用Western blot检测自噬特异性基因(Beclin-1)、泛素结合蛋白p62(p62)和微管相关蛋白质1轻链3(Microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的表达水平.结果 与对照组比较,心肌缺血/再灌注损伤后,各组大鼠心脏LVEF、FS均下降,LVIDd、LVIDs均增大.术后随访发现SBP组大鼠心脏功能指标较模型组明显改善.HE染色见SBP减轻I/R大鼠心肌细胞水肿紊乱情况.TUNEL染色显示,与对照组比较,模型组心肌组织显示凋亡细胞增多,而经SBP处理的大鼠心肌组织中凋亡细胞减少,说明SBP可以减轻I/R导致的细胞损伤.通过qRT-PCR检测发现,与对照组比较,模型组大鼠ATG12表达水平明显上调.而SBP组大鼠在1个月随访时发现ATG12表达水平较模型组降低.说明SBP抑制I/R诱导的ATG12 mRNA表达上调.与对照组比较,模型组Bax表达增加,Bcl-2表达降低.与模型组比较,SBP处理后大鼠心肌组织中 Bax表达降低,Bcl-2表达升高.表明SBP可以下调促凋亡蛋白,上调抗凋亡基因.与对照组比较,模型组Beclin-1、p62及LC3-Ⅱ/LC3-I水平均明显升高.与模型组比较,SBP下调了心肌中Beclin-1、p62和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白的表达水平.结论 心肌缺血再灌注可增强自噬反应,促进细胞凋亡.麝香保心丸可能通过调节ATG12从而抑制自噬,对受损心肌发挥保护作用,改善心肌细胞凋亡.