查看更多>>摘要:作为花青苷合成通路中的关键酶,类黄酮3'-羟化酶(flavonoid-3'-hydroxylase,F3'H)对植物花的呈色非常重要.为探究SoF3'H在紫丁香(Syringa oblata)花青苷合成中的作用,克隆SoF3'H基因,并进行蛋白同源序列比对和进化树分析,通过qRT-PCR分析该基因在不同花发育时期与器官中的表达模式,在紫丁香花瓣中瞬时沉默和过表达SoF3'H进行功能验证,并对其启动子进行克隆与分析,利用酵母单杂交试验验证SoAN2与SoF3'H的结合关系,对SoAN2的表达模式进行初步探索.结果显示,SoF3'H的CDS序列长1 587 bp,推测编码528个氨基酸;SoF3'H具有保守的p450 superfamily结构域,属于细胞色素P450家族,与油橄榄(Olea europaea)相似性最高(82.46%).随着花发育,紫丁香花瓣褪色,SoF3'H的表达水平逐渐降低;SoF3'H在盛花期花冠裂片中表达最高,在同时期根、雄蕊和茎中相对较低.沉默SoF3'H后花瓣显著褪色,花青苷含量显著降低;过表达SoF3'H的花瓣着色明显,花青苷含量显著升高.克隆得到2 000 bp的SoF3'H启动子序列具有MYB识别位点,并发现MYB家族成员SoAN2可以与该启动子直接结合,且SoAN2在紫丁香花不同发育阶段的表达呈降低趋势,与SoF3'H在不同开花时期的表达趋势基本一致,表明SoAN2可能促进SoF3'H的表达,从而调控花青苷含量变化,影响花瓣着色.