查看更多>>摘要:目的 探究磷酸肌醇 3-激酶 γ(phosphatidylinositide 3-kinase γ,PI3Kγ)调控肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macro-phage,TAM)表型影响胆管癌细胞 EMT 进程及干性特征的作用.方法 利用佛波酯(Phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)和 IL-4诱导建立M2 型TAM,并使用PI3Kγ抑制剂AS605240 进行干预,观察细胞形态变化,免疫细胞荧光染色检测细胞表面M2 特异性表型标志物CD163 表达情况.建立M2 型TAM 与人胆管癌细胞系QBC-939 共培养体系,分组为对照组、M2 组、PI3Kγ抑制剂组,进行对应处理后收集 QBC-939 细胞,Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力,免疫细胞荧光染色观察细胞内 E-cadherin 与 Vimentin 表达,Western blotting检测细胞中 E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP2 及 MMP9 蛋白表达,肿瘤细胞成球实验检测细胞干性,West-ern blotting检测细胞中肿瘤干细胞相关蛋白 CD133、OCT4 及 SOX2 蛋白表达.结果 经 PMA 和 IL-4 诱导后,细胞呈典型 M2 型形态,CD163 荧光强度明显增加,但经 PI3Kγ抑制剂干预后,M2 型细胞数目明显减少,CD163 荧光强度减弱.与 M2 组比较,PI3Kγ 抑制剂组细胞迁移数目与侵袭数目均减少(P<0.05),E-cadherin荧光密度值升高、Vimentin荧光密度值降低(P<0.05),E-cadherin 蛋白表达水平上调而 N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9 蛋白表达水平均下调(P<0.05),同时,肿瘤细胞成球数量减少(P<0.05),CD133、OCT4 及 SOX2 蛋白表达水平均下调(P<0.05).结论 抑制 PI3Kγ能够抑制 M2 型 TAM 表型转化,从而抑制胆管癌细胞的EMT进程及肿瘤干性特征,发挥抗癌作用.